全球范围内，新冠疫情仍然严峻，确诊病例数量持续攀升。快速切断病*的人际传播是控制疫情的关键，这依赖于精准快速的病*分析技术。但对于当前常用的qRT-PCR检测方法，由于需要将样本运送到实验室，因此筛查和诊断新冠疑似病例通常需要24小时以上。除此之外，尽管血清学检测方法颇为方便快捷，但在诊断急性SARS-CoV-2感染方面受到限制，灵敏度和特异性仍有待提高。因此，开发一种更为快速便捷、易于获取且有效的新冠病*检测方法，已成为迫在眉睫工作。
为了克服以上问题，来自加州大学旧金山分校及MammothBiosciences公司的研究人员日前成功开发了一种基于CRISPR-Cas12分析技术的新冠病*快速分子检测方法。据悉，该方法可以在30~45分钟内获得检测结果，阳性预测率达95％，阴性预测率达％，检测表现与基于RT-PCR的核酸检测不相上下。研究人员表示，该方法为美国CDC等机构开展的新冠病*qRT-PCR检测方法提供了直观、快速的替代方案，并有助于在临床诊断实验室之外（例如机场、急诊室等其他地点）进行即时的新冠病*检测。相关研究成果近日在线发表于NatureBiotechnology期刊，论文题为“CRISPR-Cas12-baseddetectionofSARS-CoV-2”。加州大学旧金山分校CharlesChiu教授及MammothBiosciences公司首席技术官JaniceChen为该论文共同通讯作者。
图：文章发表于NatureBiotechnology期刊
在文章中，研究人员详细介绍了他们的工作。具体而言，研究人员开发了一种快速、易于实施且准确的基于CRISPR-Cas12的检测方法，名为“DETECTR”。该方法使用环介导扩增（RT-LAMP）技术，能够对从鼻咽或口咽拭子中提取的RNA进行同时逆转录和等温扩增，然后对预定义的冠状病*序列进行Cas12检测，之后切割报告分子以确认检测到的病*。使用者可以像做家用验孕测试一样，在可视化读出条上读取结果。
图：SARS-CoV-2DETECTR检测流程示意图
研究人员首先设计了针对病*E和N基因的引物，并设计了Cas12指导RNA来检测E基因中的三种SARS样冠状病*，并仅检测N基因中的SARS-CoV-2。他们使用合成溶于无核酸酶水的体外转录SARS-CoV-2RNA基因靶标，证明基于CRISPR-Cas12的检测可以利用N基因gRNA对相关冠状病*株区分无交叉反应的SARS-CoV-2，以及使用E基因gRNA的预期交叉反应。然后，他们优化了以E基因、N基因和人源RNaseP基因为对照的分析条件。“如果在E和N基因都检测到，则认为SARS-CoV-2DETECTR检测结果为阳性；如果存在E或N基因，则检测结果为假定阳性。”作者在文中介绍，“这种结果解读与当前美国FDAEUA指南以及最近在EUA下批准的即时医疗诊断是一致的。”最后，研究人员使用参照样品和临床样品（包括36例COVID-19患者和42例其他病*性呼吸道感染患者）进行了验证，结果表明该方法检测SARS-CoV-2病*的阳性预测率达95％，阴性预测率达％。
图：运行检测所需设备
研究人员指出，与大多数基于PCR的检测方法（包括美国CDC的RT-PCR检测）相比，这种检测方法提供了一种更为快速的替代方案，并提供一个可视化的读取结果。值得
