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TUhjnbcbe - 2021/6/21 20:16:00

牛丘疹性口炎是由牛丘疹性口炎病*引起的牛和水牛传染病,以口和口唇周围发生红色丘疹性结节以及口腔黏膜的增生性、糜烂性或者溃疡性变化为主要特征。它能引起牛和人的一种急性、接触性、嗜上皮性传染病,在流行地区发病率可高达90%以上,死亡率较低,但能使牛哺乳期中断和产奶量下降,同时也能造成其他疾病的继发感染。虽然牛丘疹性口炎临床上有发病流行,但国内对该病的流行病学调查、确诊和病原分析等系统研究尚未深入。此次对新生犊牛发生口腔黏膜糜烂性病例进行采样和实验室诊断,旨在为临床上出现牛口腔黏膜溃烂和流涎疾病的诊断提供参考。

1材料1.1主要试剂病*DNA提取试剂盒、2×ESTaqMasterMix、DL-Marker购自北京康为世纪生物科技有限公司;琼脂糖凝胶购自西班牙GENE公司。1.2样品来源为南宁市兴宁区某奶水牛养殖场,临床上出现口腔黏膜溃烂和结痂症状的新生犊牛。2方法2.1样品的采集犊牛站立保定,然后用消*好的手术刀片刮取病牛齿龈糜烂充血增生物和痂皮,至于干净离心管中,置-80℃冰箱中保存备用。2.2样品的处理将冻存的病料解冻后剪碎研磨,与生理盐水按照1:3的比例混合,-80℃冻融3次,1r/min离心20min后取上清液,用以提取DNA。2.3样品总DNA提取按照DNA病*基因组提取试剂盒的操作说明书提取DNA,抽提的DNA于-40℃保存。2.4引物合成及PCR检测设计合成牛丘疹性口炎特异性引物,以抽提DNA为模板进行PCR扩增。扩增结束后,取8μL的PCR产物在1.5%的凝胶琼脂糖上进行电泳,观察电泳结果。2.5奶水牛丘疹性口炎的序列测定及BLAST比对按照DNA胶回收试剂盒说明进行纯化回收PCR产物,与pUC-T载体连接后转化DH5α感受态细胞,经PCR鉴定,取3个阳性菌液送测序。然后将测序结果上传,然后在美国国立生物技术信息中心网站(
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