小编前面给大家介绍了腺病毒载体的包装系统及流程，作为一种高效的基因递送工具，能够广泛应用于动物实验和细胞实验，但需要注意腺病毒的基因组是不能整合到宿主细胞基因组中的，因此不能用于构建细胞稳转株，只适用于瞬时表达。本期小编为大家整理了腺病毒感染细胞的过程及步骤，希望有助于大家对腺病毒载体的认识和应用。
一、腺病毒载体感染细胞过程
图1腺病毒感染细胞的过程
1.识别细胞表面受体
腺病毒是一种无包膜病毒，主要是通过病毒衣壳表面的纤突蛋白来识别细胞表面的CAR受体，并与之结合。（CAR：柯萨奇病毒和腺病毒受体）
2.细胞内吞
随后衣壳表面五邻体蛋白上的RGD氨基酸与细胞膜表面的整合素αvβ3和αvβ5相互作用，在CAR介导下形成内吞体将病毒颗粒包裹，从而内吞进入细胞。
3.衣壳构象变化
细胞内吞体的酸化作用使得病毒衣壳构象发生改变，并将病毒颗粒释放到细胞质中。
4.病毒基因组入核表达
释放出来的病毒颗粒会与细胞核上的核孔复合物结合，把病毒基因组释放到细胞核中，接着利用宿主细胞中的原料进行转录和翻译，表达出相应的外源基因。
二、腺病毒载体感染细胞实验步骤
使用病毒载体感染细胞前，通常需要先做预实验摸索一下最佳感染复数（即MOI），可以通过参考文献提供的MOI值设计梯度摸索，感染后观察荧光或检测目的基因表达情况（若病毒不带荧光），感染效率80%左右且细胞生长状态良好的条件即可确定为最佳MOI。下面是腺病毒感染细胞的步骤：
1.细胞准备：将细胞接种至所需细胞培养皿中，过夜培养，保证第二天进行病毒感染时细胞密度介于30%~50%之间。
2.病毒感染（1/2小体积感染法）及换液：感染前，从冰箱取出病毒并在冰上慢慢融化，吸去细胞原有培养基，加入1/2体积新鲜培养基，根据摸索的MOI值，加入合适体积的病毒轻轻混匀，进行感染，4h后补足至完全培养的体积。感染后10-16h，吸去含病毒的培养液，换上新鲜的完全培养液，继续37℃培养。（注：1/2小体积感染法可一定程度上提高感染效率；也可以采用正常体积的培养基去感染）
3.观察荧光：感染后24-48h，对于带GFP报告基因的病毒，可通过荧光显微镜观测GFP表达效率。如果病毒不表达荧光，可以通过目的基因的qPCR、WB、免疫荧光、免疫组化等方法判断感染效率及基因表达情况。
以上是贴壁细胞感染腺病毒的一般步骤，如果需要感染悬浮细胞，则需采用平角离心转染法：
先重悬细胞，然后将适量的病毒液加入细胞培养皿后，封好口，放入平角离心机，g离心60-90min（离心30min暂停一次，间隔10min继续离心，重复2-3次），然后放入培养箱中正常培养即可。若实验条件有限，没有平角离心机，可用离心管代替，将细胞吹打吸入离心管中，进行低速离心，去掉大部分上清，然后加入适量的病毒液，室温放置15min（尽量不要超过30min，间隔10min可以再吹打一次），然后将细胞和病毒液同时吸出转入培养皿中继续病毒感染过夜即可。原代细胞不同批次可能会存在差异，病毒感染MOI建议进行摸索实验。
对于极难给感染的细胞，如树突细胞等，可采用多次感染的方法，即感染24h后，直接二次加入病毒液进行重复感染，可显著提升感染效率。
以上便是腺病毒感染细胞的过程及实验步骤，希望对大家的实验能有所帮助。如有病毒需求或有相关问题欢迎随时与我们联系。